液相色譜峰拖尾原因 HPLC常見問題及對策

A、 峰拖尾1、篩板阻塞（a、反沖色譜柱 b、更換進口篩板 c、更換色譜柱）2、色譜柱塌陷（填充色譜柱）3、干擾峰（a、使用更長的色譜柱 b、改變流動相或更換色譜柱）4、流動相PH選擇錯誤 （調(diào)整PH值。對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱峰）5、樣品與填料表面的溶化點發(fā)生反應(yīng)（a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑b、換柱子）B、 峰前延1、柱溫低（升高柱溫） 2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng) （使用流動相作為樣品溶劑）3、樣品過載 （降低樣品含量） 4、色譜柱損壞 （見A1、A2）C、 峰分叉1、保護柱或分析柱污染圖 （取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質(zhì)污染，運用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。）2、樣品溶劑不溶于流動相 （改變樣品溶劑。如果可能采取流動相作為樣品溶劑。）D、 峰不變形1、樣品過載 （減少樣品載量）E、 早出的峰不變形1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng) （a、減少進樣體積 b、運用低極性樣品溶劑）F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰1、柱外效應(yīng)（a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路） b、使用小體積的流通池）G、 K’增加時，脫尾更嚴(yán)重1、二級保留效應(yīng)，反相模式（a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）d、更換一支柱子）2、二級保留效應(yīng)，正相模式（a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）c、加入水（或多官能團化合物）d、試用另一種方法）3、二級保留效應(yīng)，離子對 (加入三乙胺（或堿性樣品）)H、 酸性或堿性化合物的峰拖尾1、緩沖不合適 (a、使用濃度50-100mM的緩沖液 b、使用Pka等于流動相PH值的緩沖液)I、 額外的峰1、樣品中有其他組份 (正常)2、前一次進樣的洗脫峰 (a、增加運行時間或梯度斜率 b、提高流速)3、空位或鬼峰 (a、檢查流動相是否純凈 b、使用流動相作為樣品溶劑 c、減少進樣體積)J、 保留時間波動1、溫控不當(dāng) (調(diào)好柱溫) 2、流動相組分變化 (防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）)3、色譜柱沒有平衡 (在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱)K、 保留時間不斷變化1、流速變化 (重新設(shè)定流速) 2、泵中有氣泡 (從泵中除去氣泡)3、流動相選擇不恰當(dāng) (a、更換合適的流動相 b、選擇合適的混合流動相)L、 基線漂移1、柱溫波動,即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。 (控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器圖)2、流動相不均勻,流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。(使用HPLC級的溶劑，高的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣。)3、流通池被污染或有氣體 (用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1M的。（不要用鹽酸）)4、檢測器出口阻塞,高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線 (取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗)5、流動相配比不當(dāng)或流速變化 (更改配比或流速,定期檢查流動相組成及流速)6、柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生變化時 (用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗)7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成 （檢查流動相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑）8、樣品中有強保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。（使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子）9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調(diào)整（重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測器動力學(xué)范圍發(fā)生變化時，使用新的流動相）10、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處。（將波長調(diào)整至最大吸收波長處）

采用反相色譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱堿（7≤pKa≤8）樣品時，通過調(diào)節(jié)流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。對于弱酸，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當(dāng)pH值遠遠小于弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在；對弱堿，情況相反。分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液；分析弱堿樣品時，通常在流動相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

注：流動相中加入有機胺可以減弱堿性溶質(zhì)與殘余硅醇基的相互作用，減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象。所以在這種情況下有機胺（如三乙胺）又稱為減尾劑或除尾劑。