高效液相色譜儀過濾技巧

任何顆粒物進進高效液相色譜儀后都會在柱子進口端被篩板擋住，后的結果是將柱子堵塞，表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰不變形。因此，要采取各種預防措施，包括操縱步驟和商品儀器自身的各種過濾設計，努力防止或減少顆粒物進進高效液相色譜儀中，從而延長儀器和色譜柱的使用壽命，并進步數(shù)據(jù)的可靠性。

在高效液相色譜儀中，顆粒物的主要來源有三個途徑：活動相、被測樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物?！　　　?、被測樣品　　使用針筒式過濾器不可能100%得到通過過濾器的被測樣品，總會或多或少的丟失。丟失來自這樣幾方面：過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過濾器與針筒連接處的滲漏等?！　　　?、活動相　　　　無論是高效液相色譜儀HPLC級的水還是在實驗室使用超純水凈化系統(tǒng)制備的水，后一步也是通過0.2μm微孔濾膜。任何一種緩沖液中加進了固體物，必然活動相過濾將。少量雜質(zhì)顆粒存在于活動相中必然成為殘渣?！　　　〗鉀Q辦法：2. 1.活動相制備僅采用HPLC級液體時不需要過濾，反之所有活動相組成在使用前必須過濾?！　　　?.2在連接儲液瓶和泵的輸液管的末端進口采用下沉式過濾器（常見材質(zhì)有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種）也是很重要的。這個過濾器的規(guī)格為≥10μm的微孔物質(zhì)，所以它不能取代活動相過濾步驟，但是它能除往系統(tǒng)中的塵土并保證儲液瓶、輸液管使用的可靠性?！　?.3.推薦在HPLC系統(tǒng)中采用一個0.45或0.5μm的在線多孔過濾器，接在自動進樣器和柱子之間，即使已使用了保護柱。這個在線過濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如采用一個玻璃砂芯濾板，既便宜，更換又方便（幾分鐘就可更換）。若采用在線過濾，高效液相色譜儀檢測每批樣品開始前記錄下壓力值，當壓力上升一定值，例如25%或增加500psi，應該更換玻璃砂芯濾板了，更換以后沖洗幾分鐘系統(tǒng)將恢復到原來的壓力值。

3、儀器系統(tǒng)部件的磨損物　　　　后，在高效液相色譜儀HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一個主要來源是輸液泵密封墊和進樣閥旋轉軸的磨損。關于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議?！　?.1、在一般實驗室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊?！　?.2、原裝密封墊的密封效果好，更換以后輕易引起活動相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。